L’epidermolisi bollosa (EB, epidermolysis bullosa) è una malattia rara, maggiore, della cute che in casi estremi può essere fatale. I sintomi dell’EB sono continui e includono bolle indotte da traumi meccanici, ferite croniche, alterazione della guarigione delle ferite, dolore, infezioni secondarie, alopecia, perdita delle unghie, cicatrizzazione e fibrosi. La malattia si manifesta con un ampio spettro di severità e presentazioni cliniche. I principali sottotipi includono l’EB simplex, l’EB giunzionale, l’EB distrofica e l’EB Kindler. A oggi sono state riconosciute varianti patogenetiche in >20 geni. Le forme severe hanno un numero molto alto di necessità mediche non soddisfatte e sono necessarie urgentemente terapie evidence-based.

• La diagnosi precisa di EB non è importante solo per il trattamento, ma è anche un prerequisito per partecipare ai trial clinici terapeutici.
• Oltre alla presentazione clinica e alla storia familiare, l’analisi genetica può essere condotta su un singolo gene, se vi è un gene chiaramente candidato, oppure su un pannello genetico.
• Per i casi non classificabili, può essere utilizzato il sequenziamento esomico.
• Tutte queste tecniche possono portare a una diagnosi precisa.

• Come per altre malattie genetiche, è in corso la sperimentazione di vari nuovi approcci terapeutici.
• Questi includono approcci curativi (es. terapia genica, terapie basate sulle proteine e RNA), approcci rigenerativi (uso di cellule somatiche, cellule staminali mesenchimali, trapianto di midollo osseo) e approcci modificatori della malattia (piccole molecole e farmaci biologici).
• Tra queste, la terapia genica ex vivo dei cheratinociti è utilizzata da più di 13 anni.
• Con questa tecnica, le cellule staminali dei cheratinociti in coltura, chiamate olocloni, generano lamine di epitelio utilizzate per riparare i difetti cutanei.
• In uno studio recente, la gentamicina topica e intradermica ha mostrato la capacità di sopprimere le mutazioni non senso e di indurre la produzione di collagene di tipo VII e di fibrille di ancoraggio nei pazienti con EB.
• La terapia con gentamicina può dunque fornire un trattamento prontamente disponibile per i pazienti con RDEB e mutazioni nonsense.

• Differenti tipi di geni cheratinocitari sono stati studiati nell’EB utilizzando sia un vettore retrovirale o l’editing genetico con CRISPR/Cas9. [1-3]
• Quest’ultima tecnica si è dimostrata efficace in un modello murino ed è dunque una strategia promettente.
• È in fase di studio la terapia genica “HSV-1-based gene delivery” contro i cheratinociti attraverso la somministrazione topica.
• Un altro gruppo ha dimostrato che una o due iniezioni sottocutanee di oligoribonucleotidi antisenso a dosi variabili tra 400 μg fino a 1 mg ripristinano l’espressione del collagene di tipo VII e la formazione delle fibrille di ancoraggio in vivo in un modello eterologo xenograft di pelle equivalente con epidermolisi bollosa recessiva distrofica. [4]
• In una procedura innovativa, le colture di cheratinociti autologhi transgenici hanno dimostrato di avere la capacità di rigenerare un’intera epidermide totalmente funzionante in un bambino di 7 anni con una forma devastante e potenzialmente letale di EB. [1]
• Il pattern di integrazione provirale è stato mantenuto in vivo e il rinnovo dell’epidermide non ha causato nessuna selezione clonale.
• Il monitoraggio clonale ha dimostrato che l’epidermide umana è sostenuta da progenitori non equipotenti, ma da un numero limitato di cellule staminali a lunga vita, olocloni, che possono auto-rinnovarsi in vitro e in vivo e producono progenitori che reintegrano cheratinociti terminali differenziati.

• Anche se promettente, la terapia genica si è dimostrata efficace solo in un singolo caso.
• Il caso è stato ben documentato, ma non è comparabile a un trial clinico. Inoltre, anche se efficace, la procedura è molto costosa e la richiede l’ospedalizzazione.
• Sono complicati anche gli aspetti regolatori.
• Una terapia genica efficace richiederà lo sviluppo di vettori più sicuri con un basso potenziale oncogenico.
• Infine, il trattamento dovrebbe essere iniziato il prima possibile.

• La terapia genica ex vivo gene per l’EB è fattibile, come dimostrato da numerosi studi che evidenziano la prova di concetto.